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亮氨酸氨基肽酶（LAP）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
英文名稱：Leucine aminopeptidase (LAP) activity assay kit
關鍵詞:亮氨酸氨基肽酶|亮氨酸氨基肽酶活性檢測|LAP|LAP活性檢測
貨號：BC4145
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品內容：
試劑一：液體120mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存；臨用前加入2.5mL丙tong溶解。
產(chǎn)品說明：
LAP是一種膜結合酶，廣泛存在于肝、膽、胰等組織中，參與組織蛋白和某些肽類的降解更新。
各類肝病患者因肝細胞損傷，血清LAP的活性均有不同程度的升高，LAP可以作為各類肝病的一項初步檢測指標，特別是肝癌鑒別診斷的指標。
LAP分解L-亮氨酸對硝基ben胺生成對硝基ben胺，后者在405nm有*吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算LAP活性。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、丙tong、勻漿器/研缽。
操作步驟：
一、樣本處理：
組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL 試劑一）進行冰浴勻漿，然后，10000g，4℃，離心10min。
細胞：按照細胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細胞加入1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3 秒，間隔7 秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
液體：直接檢測。
二、測定操作：
1、分光光度計/酶標儀預熱30min以上，波長調至405nm，分光光度計蒸餾水調零。
2、加樣表：在微量玻璃比色皿/96孔板中分別加入下列試劑

三、酶活計算公式：
1、按微量玻璃比色皿計算：
（1）血清（漿）LAP 活力的計算：
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1nmol的對硝基ben胺定義為一個酶活力單位。
LAP（U/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109 ]÷V樣÷T=675.4×ΔA
（2） 組織、細菌或細胞中LAP 活力的計算:
1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1nmol對硝基ben胺定義為一個酶活力單位。
LAP（U/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109 ]÷(V樣×Cpr) ÷T=675.4×ΔA÷Cpr
2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1nmol對硝基ben胺定義為一個酶活力單位。
LAP（U /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109 ]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=675.4×ΔA÷W
3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol對硝基ben胺定義為一個酶活力單位。
LAP（U /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109 ]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=1.35×ΔA
V 反總：反應體系總體積，2×10-4 L；
ε：對硝基ben胺摩爾消光系數(shù)，9.87×103 L / mol /cm；
109：1mol=109nmol ；
d：比色皿光徑，1cm；
V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；
V 樣總：加入試劑一體積，1mL；
T：反應時間，3 min；
Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；
W：樣本質量，g；
500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
2、按96孔板計算：將上述計算公式中的d-1cm 改為d-0.6cm（96孔板光徑）進行計算即可。
注意事項：
1、△A大于0.5時或者A值大于1.5時建議將樣品上清用試劑一稀釋后再進行測定。
2、空白管的△A變化小于0.01。