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| 產(chǎn)地 | 中國(guó) |
| 品牌 | solarbio |
| 貨號(hào) | P5290 |
| 用途 | 羊外周血單核細(xì)胞分離液 |
| 英文名稱 | solarbio |
| 包裝規(guī)格 | 200ml/KIT |
| 純度 | 200ml/KIT% |
| CAS編號(hào) | |
| 保質(zhì)期 | 6個(gè)月 |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
1.中文名稱：羊外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒
2.分 類 ：生化試劑
3.保存條件：RT
4.品 牌 ：solarbio
羊外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒的詳細(xì)描述
羊外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒用于科研實(shí)驗(yàn)。
規(guī)格：4×200 ml/kit
保存：本產(chǎn)品對(duì)光敏感，應(yīng)該室溫避光儲(chǔ)存，保質(zhì)期 2 年。無(wú)菌開(kāi)封后，保存于室溫。 組成：
試劑A 200mL
試劑D 200mL
全血及組織稀釋液 200mL
細(xì)胞洗滌液 200mL
操作步驟：
1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝血均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。
2. 取一支無(wú)菌離心管，先加入試劑A，再加入試劑D，使兩者形成梯度界面（試劑A：試劑D的體積比為3：2，如稀釋后的血液樣本小于5ml，則先后加入3ml試劑A和2ml試劑D；如稀釋后的血液樣本大于5ml，試劑總量與稀釋后的血液樣本量相等），兩種試劑的分層一定要清晰。
3. 將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因?yàn)閮烧叩拿芏炔町?，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時(shí)間較長(zhǎng)，在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正?，F(xiàn)象）
4. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~800g，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，*的分離條件需自行摸索，離心轉(zhuǎn)速*不超過(guò)1000g）。
5. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層： 第一層為血漿層；第二層為白色單核細(xì)胞層；第三層為透明試劑D液層；第四層為半透明試劑A液層；第五層為紅細(xì)胞層（如圖示）。
6. 小心吸取第二層試劑D層和第三層乳白色細(xì)胞層到另一無(wú)菌的15ml離心管中，加入10mL細(xì)胞洗滌液或PBS，顛倒混勻，250g，離心10min。
7. 棄上清，5mL的細(xì)胞清洗液或PBS重懸細(xì)胞，250g，離心10min。
8. 重復(fù)步驟7
9. 棄上清，細(xì)胞重懸備用。
10. 差異貼壁法純化細(xì)胞：用單核細(xì)胞培養(yǎng)基以10
6個(gè)/ml的密度重懸細(xì)胞，將細(xì)胞鋪于細(xì)胞板或細(xì)胞瓶中，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
1) 2~4 h內(nèi)貼壁的為單核細(xì)胞。
2) 10~24 h內(nèi)貼壁的單個(gè)核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞 。
3) 不貼壁的為淋巴細(xì)胞。
根據(jù)不同細(xì)胞的貼壁時(shí)間存在差異，以達(dá)到簡(jiǎn)單純化單核細(xì)胞的目的。此法成本低，操作簡(jiǎn)便。如需獲得高純度的目的細(xì)胞則需選用免疫磁珠分選或者是應(yīng)用流式技術(shù)分選細(xì)胞。
血漿層
單核細(xì)胞層
試劑 D
試劑 A
紅細(xì)胞層
分層示意圖
注意事項(xiàng)：
A. 開(kāi)封前顛倒混勻，本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品，為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間，請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌條件下啟封，避免微生物污染。。
B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。
C. 血液樣本*為新鮮的抗凝血（采血2 h以內(nèi)），為保持單核細(xì)胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏。
D. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。
E. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。
F. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會(huì)影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，摸索*的分離條件。
G. 吸取過(guò)多的單核細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加；吸取過(guò)多的血漿層可能會(huì)導(dǎo)致單核細(xì)胞中血漿蛋白及血小板污染。
H. 如果要進(jìn)一步對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過(guò)程中，注意無(wú)菌操作，避免微生物污染。
I. 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。 參考文獻(xiàn)
相關(guān)產(chǎn)品：
R1018 細(xì)胞洗滌液
S9020 優(yōu)級(jí)胎牛血清
R1017 全血及組織稀釋液
31800 RPMI Medium 1640
T1300 胰蛋白酶－EDTA消化液(0.25%)不含酚紅
YA0902 一次性巴氏德吸管
各種其他動(dòng)物及其他細(xì)胞的分離液及試劑盒
參考文獻(xiàn)：
《Responses of Transgenic Melatonin-Enriched Goats on LPS Stimulation and the Proteogenomic Profiles of Their PBMCs》 作者:Minghui Yang , Jingli Tao , Hao Wu , Lu Zhang, Yujun Yao , Lixi Liu , Tianqi Zhu , Hao Fan , Xudai Cui , Haoran Dou and Guoshi Liu 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30111707
公司簡(jiǎn)介
北京索萊寶科技有限公司始創(chuàng)于2000年， 是一家集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售、服務(wù)于一體的大型高科技生物企業(yè)。公司總部位于北京，擁有1200平米研發(fā)生產(chǎn)中心，公司提供的產(chǎn)品近萬(wàn)種，超過(guò)5000種常備現(xiàn)貨，涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域，并不斷推陳出新擴(kuò)充種類，為用戶提供優(yōu)秀，專業(yè)的產(chǎn)品。立足北京，輻射全國(guó)，隨著產(chǎn)品營(yíng)銷(xiāo)戰(zhàn)略的不斷延伸，我們將逐步發(fā)展成為專業(yè)性生物科技公司。我們希望能夠和尊敬的客戶一起，利用各自的資源優(yōu)勢(shì)和勇于進(jìn)取的敬業(yè)精神，為中國(guó)生命科學(xué)研究的發(fā)展作出更多的貢獻(xiàn)。為了更好、更全面的發(fā)展，現(xiàn)公司正在誠(chéng)招各地代理商，歡迎垂詢并期待您的加入！
